Code Breakers: usare CRISPR per riscrivere la genetica

Scopri l'entusiasmante mondo dell'editing genetico e scopri l'incredibile potenza della tecnologia CRISPR direttamente dalla tua classe! In questo esperimento, gli studenti esplorano l'ingegneria genetica all'avanguardia utilizzando CRISPR-Cas9 per eliminare i geni cromogenici viola in batteri sicuri per l'uso in classe.
Inoltre, gli studenti testano la specificità di CRISPR-Cas9 in prima persona utilizzando template gRNA CRISPR non specifici e analizzandone i risultati.

• Esplora l'ingegneria genetica, CRISPR e il dogma centrale della biologia molecolare in questo esperimento completo.
• Trasforma Escherichia coli sicuro per l'uso in classe con template di RNA CRISPR per testare la specificità di targeting della tecnologia
• Identifica il knockout genico riuscito in base al colore delle cellule

• Dimensione del gruppo: per 10 gruppi di studenti
• Tempo richiesto:
• Preparazione: 50 minuti
• Incubazione: durante la notte
• Trasformazione: 90 minuti
• Magazzinaggio: per alcuni componenti è necessario congelarli al momento della ricezione

• Istruzioni
• LyphoCells™ E. coli Purple
• Ampicillina
• IPTG
• Cloramfenicolo
• ReadyPour™ SOC-agar
• pCas9-PurpleGuide (plasmide)
• pCas9-ControlGuide (plasmide)
• CaCl 2
• Soluzione cellulare competente
• Terreno liquido SOC (brodo)
• Additivo SOC (SOLO per ReadyPour)
• Piastre Petri (piccole)
• Piastre Petri (grandi)
• Pipette di trasferimento con micropunta in plastica
• Pipetta da 10 ml avvolta (sterile)
• Anse di inoculazione (sterili)
• Provette per microcentrifuga
• Provette coniche da 50 ml

• Micropipetta automatica (5-50 µl) e punte
• 2 x bagni d'acqua (37˚C e 42˚C)
• Fforno di incubazione (facoltativo ma consigliato)
• Termometro
• Centrifuga/e
• Vortex (facoltativo)
• Rack galleggianti
• Pompe o bulbi per pipette
• Ghiaccio
• Pennarelli
• Nastro adesivo
• Piastra riscaldante o forno a microonde
• Guanti caldi